Real Time PCR研究进展及其在海洋病原生物 检测中的应用

通常荧光扩增曲线可以分成四个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段，线性增长期和平台期(图1)。在PCR反应早期，即荧光背景信号阶段，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，无法判断产物量的变化，而后荧光的产生进入指数期、线性期和最终的平台期。在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，而且PCR的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，所以根据最终的PCR产物量不能计算出起始DNA拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之问存在线性关系，因此可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量，并且由此来推断起始模板的量。